常用菌株选择

来源:本站    浏览:25次


常用菌株及蛋白纯化标签选择



菌株

筛选抗生素

基因型

应用

BL21(DE3)

F-ompT hsdSB(rBmB-) gal dcm(DE3)

BL21(DE3)菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体(如pET系列)的基因。可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶,用于pET系列,pGEX,pMAL等质粒的蛋白表达。

Rosetta(DE3)

氯霉素

F-ompT

hsdSB(rB-mB-)

galdcm(DE3) pRARE(argU, argW, ilex, glyT, leuW, proL) (CamR)

Rosetta(DE3)菌株具有氯霉素抗性,补充大肠杆菌缺乏的6 种稀有密码子(AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, GGA)对应的tRNA,提高外源基因,尤其是真核基因在原核系统中的表达水平,该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3区 (DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶),同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶,可用于pET系列,pGEX,pMAL等质粒的蛋白表达。

BL21(DE3)pLysS

氯霉素

F- ompT hsdS(rB-mB-) gal dcm(DE3)pLysS CamR

BL21(DE3)pLysS 菌株携带pLysS质粒,具有氯霉素抗性。pLysS含有表达T7溶菌酶的基因,T7溶菌酶可以作用于大肠杆菌细胞壁上的肽聚糖溶解大肠杆菌,还可与T7 RNA聚合酶结合抑制其转录活性,进而降低目的基因的背景表达水平,但不干扰IPTG诱导的表达,适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3区 (DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶)。BL21(DE3)pLysS 感受态细胞由特殊工艺制作,pUC19质粒(2686bp,AmpR)检测转化效率>108 cfu/μg DNA。

OrigamiB(DE3

卡那霉素

四环素

F-ompT hsdSB(rB-mB-) gal dcm lacY1 ahpC (DE3) gor522::Tn10 trxB (KanR,TetR)

Origami B (DE3)菌株包含突变的硫氧还蛋白还原酶 (thioredoxin reductase) (trxB)和谷胱甘肽还原酶 (glutathione reductase) (gor)基因,表达主要还原途径的两个关键酶。有利于形成正确折叠的含有二硫键的蛋白,增强蛋白的可溶性。 该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3区 (DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶),可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶,可用于pET系列,pGEX,pMAL等质粒的蛋白表达,具有卡那霉素和四环素抗性,不能用于具有卡那霉素抗性质粒的表达。Origami B (DE3) 感受态细胞由特殊工艺制作,pUC19质粒(2686bp,AmpR)检测转化效率>108 cfu/μg DNA。

TOP10

F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80 lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 araΔ139 Δ(ara-leu)7697 galU galK rpsL (StrR) endA1 nupG

TOP10来源于MC1061菌株,是目前实验室最常用的感受态细胞之一,基因型与DH10B高度类似 (DH10B为galE15型,而TOP10为galU型)。TOP10生长速度快 (比DH5α快,但比Mach1-T1生长速度慢),10小时可见克隆。recA1和endA1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。可用于构建克隆,蓝白斑筛选等实验。TOP10感受态细胞经特殊工艺制作,pUC19质粒(2686bp,AmpR)检测转化效率>5×108 cfu/μg DNA。

DH5α

F-φ80 lac ZΔM15Δ(lacZYA-arg F)U169 endA1 recA1 hsdR17(rk-,mk+) supE44λ- thi-1 gyrA96 relA1 phoA

DH5α菌株是实验室最常用的感受态细胞。缺失核酸内切酶 (endA),提高了质粒DNA的产量和质量;重组酶缺陷型 (recA)减少插入片段的同源重组概率,保证了插入DNA 的稳定性;lacZΔM15的存在使DH5α可用于蓝、白斑筛选。


科学
精准
高效