技术服务


体外转录实验服务

体外转录是指在含有RNA转录酶、必要的蛋白质因子、核苷三磷酸等条件的体外无细胞系统中,,模仿体内转录过程以DNA为模板转录生成RNA的技术。

解释生物可提供长度达10 kb以上的体外转录的RNA。我们的RNA分子可针对于不同的下游场景进行优化定制,如非编码RNA(miRNA、siRNA、lncRNA)、原位杂交、体外翻译、RNA-蛋白互作研究、以及作为反转录反应的模版等。

经过我们的特殊优化,我们使用的体外转录载体可以合成高质量的RNA。我们也可以使用客户提供的体外转录载体。除了mRNA以外,我们还可以制备一系列特定短序列的小RNA分子,如CRISPR/Cas9系统中的gRNA、miRNA、lncRNA等。对于开发高效的IVT mRNA分子,我们提供一站式的mRNA基因递送解决方案,涵盖mRNA设计、综合质量控制以及CRO验证等服务。


体外转录实验原理


体外转录技术原理.jpg

体外转录制备与QC

我们使用体外转录方法制备RNA,该方法使用了位于目的基因DNA模板序列上游的T7启动子,并且在适当的反应条件和ATP存在下,通过噬菌体T7 RNAP作用高效转录出RNA分子。T7 RNAP是一种强大的酶,使用这种酶的转录反应可以在几个小时内产生大量的有功能的RNA。我们典型的mRNA 生产流程是从模板DNA序列的设计和合成开始,然后将其克隆到体外转录载体中。然后对质粒DNA进行纯化、验证和线性化,然后进行体外转录反应,从而产生所需的转录本。然后通过硅胶柱子纯化mRNA,这是我们默认的纯化过程。我们还可以根据要求使用磁珠来纯化mRNA

我们所有合成的RNA产品经过严格的质量检验以保证其不含污染物并且序列与设计时保持一致。根据服务方案的不同,我们的质检方法可包括:

1、酶切鉴定与Sanger测序确保体外转录使用的DNA载体序列正确。

2、最终QC包括使用变性PAGE胶或者琼脂糖凝胶电泳鉴定RNA转录本大小。


体外转录制备与QC.jpg


体外转录服务内容


服务项目

周期

交付标准

价格

体外转录

1~2周

1、浓度:≥200ng/μl
2、数量:5μg
3、纯度:>90% by agarose gel electrophoresis
4、OD260/OD230:2.4~2.0
5、OD260/OD280:2.0~1.7
6、储存溶液:ddH2O

7、外观检测:Clear and free of foreign particles

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体外转录RNA +地高辛(DIG)标记

体外转录RNA +生物素(Biotin)标记

 




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