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印迹杂交实验（Southern Blot）实验服务
Southern Blot杂交又称凝胶电泳压印杂交技术，是由Edward M. Southern在1975年首先发明的用于检测DNA的一种核酸杂交技术，并因此而得名。其原理是根据毛细管作用的原理，将在电泳凝胶中分离的DNA片段转移并结合在适当的滤膜上，然后通过与标记的单链DNA或RNA探针的杂交作用，检测这些被转移的DNA片段
实验简介
技术应用：
1、定性及定量分析基因组中特定基因；
2、基因突变分析及限制性片段长度多态性分析。
应用范围：
1、遗传病诊断：传统的基因诊断技术主要是以基因探针技术为基础而建立的一些检测方法。
2、DNA图谱分析：a.高度的特异性；b.稳定的遗传性；c.体细胞稳定性
3、检测样品中的DNA及其含量
4、PCR产物分析
Southern Blot 实验流程
主要步骤包括将基因组DNA进行限制性内切酶消化，琼脂糖凝胶电泳分离，经碱变性等预处理之后，平铺在已用电泳缓冲液饱和了的两张滤纸上，在凝胶上部覆盖一张硝酸纤维素滤膜，接着加一叠干滤纸，然后再压盖一重物。由于干滤纸的吸引作用，凝胶中的单链DNA便随电泳缓冲液一起转移。这些DNA分子一旦与硝酸纤维素滤膜接触，便会牢牢地与之结合，而且是严格按照它们在凝胶中的谱带模式，原样地被吸印到滤膜上。在80℃下烘烤12h，DNA片段就会被稳定地固定在硝酸纤维素滤膜上。然后将此滤膜移放在加有标记探针的溶液中进行核酸杂交，漂洗去游离的没有杂交上的探针分子，用适当的方式显色，与溴化乙锭染色的凝胶谱带作对照比较，便可鉴定出与探针具有同源性的限制片段的大小和位置。
Southern Blot 实验流程
Southern Blot 样品要求
1、待杂交目标基因序列和含有待杂交基因的阳性质粒，碣石会依据Southern杂交实验要求重新选择全长或部分区域作为探针序列，使用PCR法标记探针。
2、待杂交的高质量DNA样品质量至关重要，决定实验的成败，请确保DNA抽提质量，尽量采用进口试剂盒提取或委托钟鼎生物提取。
A、基因组DNA检测：OD260/OD280=1.8-2.0，基因组要求DNA总量不小于10ug，浓度大于50ng/ul；不同作物所需提供DNA量见下表；
B、请提供基因组DNA检测图片，要求无降解，无蛋白污染，电泳检测标准请参考
C、检测样品低温运输
作物 | 基因组大小（Mb） | DNA杂交需求量（μg） | 植物叶片需求量 |
水稻 | 389 | 20 | 5 |
棉花 | 780 | 40 | 10 |
油菜 | 1130 | 50 | 10 |
玉米 | 2300 | 100 | 10 |
小麦 | 4500 | 100 | 10 |
大豆 | 1100 | 50 | 10 |
3、客户如果无法提供高品质的基因组DNA样品，碣石生物可以帮助制备可用于Southern Blot检测的DNA样品，客户提供样品要求如下：
样品类型 | 样品需求 | 保存条件 | 运输条件 | 备注 |
动植物组织 | 1、单个样品>1g，EP管或冻存管装。 2、样本应尽量新鲜 3、冻存样本避免反复冻融。 | -80℃ | 干冰 | 所有样本均须有唯一标记，且标记清晰可识 |
贴壁/悬浮细胞 | 1、细胞至少5*107个/份，常温离心收集细胞。 2、不要使用盐溶液冲洗。 3、样本应尽量新鲜。 | -80℃ | 干冰 | |
大肠甘油菌 | 1、>500μL 2、测序结果; 3、EP管上标明抗性。 4、三个月内，活性较好的菌。 | -80℃ | 冰袋 |
4、请注明基因组DNA酶切方案，如果项目中需要用到非常规的限制性内切酶，需额外加收酶切费用或由客户提供相应的限制性内切酶。
为了更好的保证southern blot实验结果的准确性与美观性:
1、除去Marker和阳性对照，我们建议样品数量不要超过8个，样品太多会导致边缘条带变形。
2、曝光时间太短，弱带无法显示，曝光时间太长，背景会很高，因此我们会调整曝光时间，分别提供1小时、2小时、过夜等不同时间的曝光片，确认实验的结果的准确性。
3、southern杂交的灵敏度是有限的，丰度太低的片段无法被检测出来。