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凝胶迁移实验（EMSA）实验服务
凝胶迁移实验又称凝胶阻滞实验或电泳迁移率实验（Electrophoretic Mobility Shift Assay，EMSA），是一种检测蛋白质和DNA序列相互结合的技术，可用于定性和定量分析。目前已用于研究DNA结合蛋白和特定的DNA序列的相互作用，是转录因子研究的经典方法。
其原理是基于DNA结合蛋白与DNA的特异性结合，依据实验需要，设计标记探针、非标记探针、蛋白特异性抗体等参照物，通过电泳迁移率的变化来进行定性和定量分析。
我们的优势
l 自建的蛋白表达平台，方便的获得诱饵蛋白；
l 直接测定蛋白质与核酸的相互作用，提供定性和定量信息。
l 可用于研究多种类型的相互作用，如特异性结合、非特异性结合、序列特异性等。
l 技术简单，实验操作相对容易。
l 可以使用不同的标记方法和检测技术进行适应不同实验需求。
EMSA实验流程
根据实验设计特异性和非特异性探针，当核酸探针与蛋白样本混合孵育时，样本中可以与核酸探针结合的蛋白质与探针形成蛋白-探针复合物，这种复合物由于分子量大，在进行PAGE电泳时迁移较慢，而没有结合蛋白的探针则迁移较快。孵育的样本在进行PAGE电泳并转膜后，蛋白-探针复合物会在膜靠前的位置形成一条带，说明有蛋白与目标探针发生互作。
EMSA的应用
1、验证型EMSA
用于验证探针是否含有可与蛋白质结合的位点。将结合位点突变，以突变探针为对照，野生型探针出现迁移条带，而突变探针未出现迁移条带，则说明该探针含有可与蛋白质结合的位点。
2、竞争型EMSA
探针序列不变，不含修饰基因的探针称为冷探针。冷探针与标记探针竞争性的与蛋白结合，冷探针不显示影出迁移条带。以冷探针为对照，标记探针出现迁移条带，而冷探针迁移条带减弱或消失，则排除了假阳性干扰，增加实验结果准确性。
3、超迁移EMSA
使用目标蛋白的特异性抗体，蛋白探针复合物被抗体识别并结合，该三聚复合物在凝胶电泳中，迁移速率再次增大，出现在蛋白探针复合物的上方的超迁移条带，验证了探针与目的蛋白的特异性结合。
EMSA服务内容
服务内容 | 服务说明 | 周期 | 交付 | 价格 |
5'生物素(biotin)探针合成 | 探针标记及合成 (≤59bp) | 1-2周 | 1、分析报告 2、探针设计合成信息； | 咨询客服免费询价 |
探针标记及合成 (60bp-300bp) | 2-3周 | |||
EMSA实验 | 验证性EMSA：验证生物素标记探针与结合蛋白互作的EMSA | 1-2周 | ||
竞争性EMSA：生物素标记探针、非标记探针与结合蛋白互作的EMSA | ||||
超迁移EMSA：特异性抗体进一步鉴定探针与蛋白结合物的EMSA |
注：如果客户提供序列，由碣石负责蛋白的制备，最终在交付分析报告的同事，也会交付＞85％纯度的蛋白、质粒、菌株以及对应的蛋白报告
EMSA服务样品要求
样品类型 | 样品需求 | 保存条件 | 运输条件 | 备注 |
探针 | 探针序列 如无探针序列，请提供DNA结合蛋白相关信息或相关文献，便于碣石生物技术人员设计探针 | -20℃ | 冰袋 | 所有样本均须有唯一标记，且标记清晰可识 |
动植物组织 | 1、单个样品>2g，EP管或冻存管装。 2、样本应尽量新鲜 3、冻存样本避免反复冻融以致降解。 | -80℃ | 干冰 | |
贴壁/悬浮细胞 | 细胞至少5*107个/份，常温离心收集细胞。-80℃保存。 | -80℃ | 干冰 | |
核蛋白或转录因子 | 细胞核蛋白或纯化的转录因子，部分实验亦可使用重组表达的蛋白，依据实验设计每张膜至少提供50ul，浓度大于0.5mg/ml | -80℃ | 干冰 | |
抗体 | 结合蛋白特异性抗体50μL以上，浓度大于0.5mg/ml | -80℃ | 干冰 | |
质粒 | 1、>20μg 2、测序结果; 3、EP管上标明抗性。 | -20℃ | 冰袋 | |
大肠甘油菌 | 1、>500μL 2、测序结果; 3、EP管上标明抗性。 4、三个月内，活性较好的菌。 | -20℃ | 冰袋 |
EMSA 的优点
优点 | 缺点 |
容易掌握，简单易行，实验要求条件不苛刻，可以适应一定范围内的反应条件变动； | 无法衡量电泳过程中的化学平衡，在电泳过程中发生的快速解离会影响对复合物的检测； |
同位素标记探针具有非常短的半衰期并且对人的健康有害，而生物素标记更稳定、准确和方便，且亲和力高； | 在EMSA实验中，复合物的形成与许多因素有关，并不能直接反映分子大小或者鉴定复合物中的各种蛋白质； |
该技术可以检测的核酸分子大小和结构（单链、双链、三链、四链、环状核酸）范围很广，并可提供蛋白结合在核酸上的准确序列位置； | EMSA在很大程度上属于定性实验，比如：可以检测蛋白-DNA复合物的形成与否，并不能精细的检测结合反应的上调或下调； |
在合适的条件下，在单个反应体系中就可以通过不同复合物的形成，检测不同蛋白与不同核酸分子之间的结合情况； | 实验中并不考虑体内环境中影响蛋白DNA结合的因素，比如染色质的结构对复合物形成的影响，因此即使EMSA实验结果反映蛋白可以与DNA结合。 |
能检测的蛋白大小范围很广，从寡肽到转录因子复合物都能检测，并且该实验既可以使用纯蛋白也可以使用细胞提取物。 |