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酵母蛋白表达服务
酵母蛋白表达系统是一种高经济性的,应用较广泛的真核表达系统,可分析表达表达也可胞内表达。即包含了原核表达系统的周期短、成本低、操作简单,易于放大等优点;同时具备了真核细胞表达系统对蛋白的空间折叠,糖基化修饰等能力,使得蛋白可溶性大幅度提高,为研究蛋白的生理活性提供了强有力的工具。
毕赤酵母体系是真核体系中操作最简单、成本低廉的系统,在毕赤酵母体系中蛋白转录后糖基化所增加的寡糖链长度(平均每个支链8-14个甘露糖残基),非常接近高等真核生物的结构。
酵母蛋白表达平台由多年从事酵母表达操作的试验人员组成,经验丰富,采用自行改造的高效分泌载体和宿主组合,可在最大程度上实现最高质量的蛋白表达。经客服反馈,以我平台所制备的蛋白原料为抗原所制备的单抗均具有很好的识别天然蛋白的优良特性。
酵母系统优势
1、含有特有的强力AOX(醇氧化酶基因)启动子,用甲醇可严格的调控外源基因的表达;
2、作为真核表达系统,毕赤酵母具有真核生物的亚细胞结构,具有糖基化、脂肪酰化、蛋白磷酸化等翻译后修饰加工功能;
3、性质较原核表达的蛋白质更加稳定,特别适合于表达和制备具有功能的蛋白:如结核类蛋白、防御素类蛋白、白介素蛋白及细胞因子等;
4、培养成本低,产物易分离,毕赤酵母所用发酵培养基成本合理,一般碳源为甘油或葡萄糖及甲醇,其余为无机盐,培养基中不含蛋白,有利于下游产品分离纯化;
5、外源蛋白基因遗传稳定,外源基因能以高拷贝整合到毕赤酵母基因组中,不能丢失并能得到高表达菌株;
6、无自产内毒素;
7、产物可正确折叠和高效分泌;
我们的承诺
无风险定制,不成功不收费;
(注:该无风险定制蛋白服务仅适用于800个氨基酸以内的蛋白质。如果您需要表达超过800个氨基酸的蛋白质,我们将按步骤收费。)
表达体系系统选择
可选表达载体
GAP启动子载体:pYE-GAP
常规商业化载体:分泌表达:PICZαA、pPIC9K
GS115,X33菌株
SMD116蛋白酶缺失型菌株
注:客户提供表达菌株的略过此步骤,仅提供表达质粒的可选择需要电转化的表达菌株
服务内容
服务内容 | 试验步骤 | 试验周期 | 交付材料及数据 | 价格 |
毕赤酵母表达载体构建 | 1、基因合成 | ~2周 | 1、基因合成报告 2、测序验证报告 3、包含表达质粒的DH5a克隆菌株 4、表达质粒 | 酵母蛋白表达服务属于科研型服务项目,为了给您提供更专业、细致的服务支持 |
2、亚克隆至载体 | 1-2周 | |||
3、质粒抽提及线性化 | 2-3天 | |||
毕赤酵母蛋白表达鉴定 | 4、电机转化及鉴定 | 1-2周 | 5、阳性表达菌株 6、高拷贝阳性菌株(可选) | |
5、阳性克隆子筛选(PCR法) | 2-3周 | |||
6、高拷贝菌株筛选 | ||||
7、表达小试(5-10菌株) | 1-2周 | |||
8、表达分析鉴定(WB) | ||||
9、定株,优化表达条件 | ||||
毕赤酵母蛋白纯化及鉴定 | 10、小规模培养2-5升 | 2-3周 | 7、蛋白生产完整流程报告 8、所有原始图片 9、发货蛋白 10、蛋白指纹图谱(可选) 11、蛋白质谱分子量(可选) | |
11、大规模培养10升以上 | ||||
12、表达上清液浓缩 | 1-2周 | |||
13、低压亲和纯化 | ||||
14、PAGE分析纯化过程 | ||||
15、WB鉴定纯化后蛋白 | 1周 | |||
16、PEM检测(可选) | 2-3周 | |||
17、MS检测(可选) | 1-2周 |